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養(yǎng)殖場(chǎng)用非洲豬瘟檢測(cè)試劑盒也可用于環(huán)境檢測(cè)非洲豬瘟試劑盒

更新時(shí)間:2021-01-27點(diǎn)擊次數(shù):1176

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【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名稱(chēng):非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒(PCR熒光探針?lè)ǎ?/span>

英文名稱(chēng):Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus (PCR Fluorescence Probing)

[預(yù)期用途]

本試劑盒主要用于檢測(cè)疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒(ASFV, African Swine Fever

Virus)核酸,適用于非洲豬瘟病毒的檢測(cè)、輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

【試劑盒組分】

1、試劑盒組成及貯藏條件

名稱(chēng)

50 T

貯藏條件

1、反應(yīng)液A

ImL

-20°C

2、反應(yīng)液B

ImL

3、陽(yáng)性對(duì)照

250μL

4、陰性對(duì)照

250μL

5PCR反應(yīng)液

850μL

6、酶混合液

150μL

 

2、需自備材料:生理鹽水、無(wú)菌槍頭、熒光PCR反應(yīng)管、記號(hào)筆等。

【操作步驟】

一、樣品制備

1、 血液樣品:采集抗凝血(抗凝劑為EDTA)或血清樣品,編號(hào)備用。

2、 組織樣品:采集脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體等病變組織樣品或軟蜱0.1g(黃豆粒大小),眼科剪剪碎于組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨,再加1mL生理鹽水混勻,4°C條件下8000 rpm/分鐘離心2分鐘,取上清液于滅菌離心管中,編號(hào)備用。

二、DNA提取

取反應(yīng)液A 20μL分別加入到新的1.5mL離心管,加入抗凝而或血清或組織上清液2μL混勻,室溫(20°C左右)靜置3分鐘,加入反應(yīng)液B 20μL,吹打混勻即可,若為抗凝全血,則需8000rpm/分鐘再離心2分鐘后做為待檢DNA溶液。

二、PCR擴(kuò)增

1、配液:取出PCR反應(yīng)液、酶混合液,在室溫*融化后,充分混勻,瞬離,可將酶混合液全取岀直接加入到PCR反應(yīng)液中,充分混勻,瞬離后按每份20μL分裝使用;或按照每份PCR反應(yīng)液17μL, 酶混合液3μL的比例取一定的試驗(yàn)用量,混合兩種反應(yīng)液,瞬離后按照每份20μL分裝到熒光PCR 反應(yīng)管中,剩余試劑立即凍存;(操作過(guò)程要注意避光

2、加樣擴(kuò)增:分別向上述PCR反應(yīng)管中加入5μL樣本 DNA或陰性對(duì)照或陽(yáng)性對(duì)照,混勻并瞬離, 放入熒光PCR儀上運(yùn)行以下程序:

步驟

條件

循環(huán)數(shù)

UNG處理

50°C 2分鐘

1

預(yù)變性

95°C 3分鐘

1

預(yù)擴(kuò)増

95°C 8 秒 55C 8 

5

PCR擴(kuò)增

95°C 8 秒 55°C 8 

40

  熒光通道選擇FAM,在40循環(huán)階段每個(gè)循壞的55°C時(shí)收集熒光信號(hào)。設(shè)置擴(kuò)增體系為25μL,同時(shí)要選擇 passive reference 和 quencher 為 none 的模式。

  (注:若熒光PCR儀(如ABI7500)按說(shuō)明書(shū)中的反應(yīng)程序設(shè)置后因持溫時(shí)間短無(wú)法運(yùn)行,可將預(yù)擴(kuò)增和PCR擴(kuò)增條件變更為95°C: 5秒 55°C:30秒。)

   
 
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